编者按近年来，斑马鱼Crispant技术的崛起标志着基因编辑领域的一次重要突破。其高效性、低成本与易操作性使其成为疾病机制研究、药物筛选及功能基因组学的理想工具，未来在精准治疗方面有望展现更大潜力。

Crispat的定义基于CRISPR/Cas9技术，即通过将Cas9蛋白与目标gRNA结合（形成RNP），注射到斑马鱼的1细胞期，从而获得的F0代敲除嵌合体斑马鱼（整体敲降），可直接应用于表型观察和基因功能研究。与传统的m啡啉介导基因敲降技术相比，Crispant技术存在诸多优势：

Crispant技术的优势

1. 研究周期短：最短2周内可以观察胚胎期表型，通常在4周内可提供包括靶点效率验证的完整研究报告。

2. 可在斑马鱼发育任何阶段观察表型：由于m啡啉在胚胎发育过程中的作用逐渐减弱（细胞分裂和m啡啉降解），一般仅能用于1周内的胚胎表型观察；而Crispant则在基因组层面实现基因编辑，其作用是持续的，从胚胎到成年均可观察表型。

3. 毒副作用低：m啡啉常造成毒副作用，可能产生非敲降的表型，尤其是激活p53信号，因此一般需要合成2条m啡啉以相互验证（增加了成本）；而Crispant系统毒副作用低，通过一次设计和筛选可获得多个高效且特异的靶点，不同靶点的表型能够相互验证，并可同时注射多个靶点以实现基因完全敲除。

4. 可同时敲除两个或以上目标基因：在斑马鱼中，目标基因往往有多种亚型，使用两个m啡啉进行同时注射很可能导致斑马鱼胚胎致死或产生非特异的表型。Crispant能够有效地针对多个基因进行同时敲除，同时不会产生非特异性表型。

5. 便于后续稳定品系构建：Crispant筛选获得的靶点可直接用于稳定敲除斑马鱼品系的构建，显著节省建系时间和费用。

应用场景

Crispat技术通过多重sgRNA协同编辑和F0代表型直筛，将基因功能研究的周期缩短至传统方法的1/5，成本降低超过50%。凭借其高效性、低成本与易操作性，使其成为疾病模型构建、基因功能解析及药物筛选的理想工具。

1. 疾病模型构建：

已有研究将其应用于癫痫模型的构建，敲除irf2bpl或cars2基因以模拟患者的抽搐表型，并用于抗癫痫药物筛选，如丙戊酸的验证。同时也用于凝血障碍模型的构建，敲除adcyap1b基因后导致凝血因子下调，表现为自发性出血，适用于抗血栓药物的评价。

2. 基因功能解析：

研究表明，敲除kctd10基因可诱导心脏线性畸形，用于心脏发育的研究；而通过rfx6基因的敲除可诱导糖尿病样表型，应用于胰腺功能的研究。

3. 药物筛选：

研究已通过敲除斑马鱼的cars2、Sigirr、cbsb基因等诱发相关表型，涉及神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢和罕见病及肿瘤个性化等药物筛选。

作为健康美丽产业的CRO服务开拓者与引领者，作为斑马鱼生物技术的全球先驱，Z6·尊龙凯时建立了“斑马鱼、类器官、哺乳动物、人体”的多维生物技术服务体系。拥有超过10年的斑马鱼基因编辑技术经验，具有功能研究周期短、表型直观、活体分子机制的快速验证，以及高产卵量和阳性表型个体多样性的优点，能够为广泛科研场景下的各类需求提供流程化、体系化和模块化的斑马鱼Crispant技术服务，欢迎有需要的读者咨询！