细胞有几个核？并非所有细胞都只有一个细胞核。例如，破骨细胞是一种高度分化的多核细胞，它们没有克隆能力，无法进行传代培养，同时在体外培养也相对困难。

Section01 骨代谢: 背景知识

首先，我们来了解一下骨代谢的专业术语。骨重塑是指破骨细胞清除旧骨或受损骨质，并由成骨细胞形成的新骨取代的过程。这个过程由破骨细胞和成骨细胞之间的交流来调控。

破骨细胞（osteoclasts，OCs）是一种源自造血干细胞的骨吸收细胞，主要通过分泌酸性酶和蛋白水解酶来降解骨质。而成骨细胞（Osteoblasts，OBs）则是由间充质前体细胞在转录因子的作用下分化而成，最终演变为骨细胞。

骨矿化是指钙等无机盐在骨组织中的沉淀过程，骨骼作为一种特殊的结缔组织，具有高度矿化的结构。骨骼不仅为身体提供结构支撑和肌肉附着点，同时保护大脑和内脏器官，并为骨髓造血组织提供生存场所。此外，骨骼还作为无机离子的主要储存地，参与体内矿物质稳态和能量代谢。

骨吸收是指骨钙的溶出过程，即将钙从骨组织中释放到血液中。破骨细胞是唯一能够降解骨组织的细胞，它们在骨稳态和健康维护中发挥着关键作用。这些细胞是来自血液和骨髓中单核细胞的组织特异性多核巨噬细胞，其分化过程经历多个阶段，包括破骨细胞前体、多核破骨细胞和成熟破骨细胞。

Section02 破骨细胞的体外诱导

巨噬细胞系RAW264.7的破骨细胞诱导实验方案为：

1. 使用含10% FBS的α-MEM培养基，将RAW264.7细胞制成细胞悬液，以3×10⁴ cells/孔的密度接种于24孔板中。
2. 在细胞接种12小时后，加入RANKL（20-100ng/mL）。每3天更换培养基，并同时补加RANKL。
3. 在第4天时，较为明显的多核破骨细胞开始出现，并在第5到第6天时逐渐增多。由于RAW264.7细胞表达M-CSF及其受体c-fms，因此仅加入RANKL就足以诱导破骨细胞分化。

Section03 破骨细胞的鉴定方法

一、形态学鉴定

1. 多核巨细胞在显微镜下可见≥3个细胞核（成熟破骨细胞通常含有10-20个核）。

2. 破骨细胞的边缘呈现“皱褶缘”（ruffled border），是其骨吸收功能的重要区域。通过鬼笔环肽染色的共聚焦显微镜观察，可以显示出特征性的"封箱带"结构。

二、功能标志物检测

1. Trap染色：破骨细胞产生的一种主要酶是抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap），该酶特异性分布于破骨细胞中，通常被用作鉴别破骨细胞的重要标志物。

2. 骨吸收实验：将骨髓单核细胞（BMMs）接种于羟基磷灰石涂层板或骨片上，观察吸收陷窝的情况。培养期间，每天补充新鲜含有M-CSF和RANKL的培养基，10天后利用扫描电子显微镜（SEM）对吸收凹陷进行成像，并计算凹陷面积。

三、分子标志物检测

可通过qPCR/WB检测Trap、NFATc1、CTSK和DC-STAMP等分子标志物。

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